狗和猪的DNA若何鉴定 ，关键不是观察毛色、肉质或表形 ，而是从样本中提取DNA ，选择狗与猪之间存在不变差距的物种象征 ，再通过PCR、实时荧光PCR或DNA测序进行判断。最常用的了局是：狗靶标扩增、猪靶标不扩增 ，注明检测到狗源DNA；反过来则注明检测到猪源DNA。若两种靶标都出现 ，还必要进一步判断是混合样本、交叉传染 ，还是扩增不够特异。
先确定要鉴定的是“物种”还是“具体个别”
若是问题是“这份样正本自狗还是猪” ，属于物种鉴定 ，可选取狗、猪特异性PCR ，或扩增线粒体细胞色素b、COI等物种象征后测序比对。这类检测通常可能回覆样本中是否存在狗DNA或猪DNA。
若是问题是“是不是某一只特定的狗”或“是不是某一头特定的猪” ，则不能只做通常物种PCR ，还必要筹备已知个别的对照样本 ，进一步检测STR、SNP等个别遗传象征。物种检测只能注明起源属于狗或猪 ，不能单独确认具体个别身份。
样本是新鲜组织、血液或带毛根的毛发：优先做单一物种PCR
这类样本中的DNA通常相对齐全 ，适合先做狗、猪双通路检测 ，或者别离做狗特异性PCR和猪特异性PCR。现实操作能够按以下挨次进行：
- 纪录并分装样本。给样本编号 ，纪录起源和取样部位。组织可取少量内部部门 ，血液应使用相宜的抗凝样本；毛发尽量选择带毛根的部门 ，由于毛根细胞通常比单纯毛干含有更多核DNA。
- 提取DNA。使用合用于动物组织、血液或毛发的DNA提取试剂盒。提取后可用吸光度、荧光法或电泳初步观察DNA量和齐全性 ，但DNA浓度正常并不代表肯定适合后续扩增。
- 选择检测靶标。想急剧分辨狗和猪 ，可使用经过验证的狗特异性引物与猪特异性引物；想获得更齐全的物种信息 ，可扩增线粒体象征并进行测序。
- 设置对照。至少应有已知狗DNA阳性对照、已知猪DNA阳性对照和无模板阴性对照。对照了局不正确时 ，样本条带不能直接诠释。
- 扩增并读取了局。PCR产品可通过凝胶电泳观察 ，实时荧光PCR则凭据扩增曲线和尝试室设定的判定尺度读取。测序法还要将序列与靠得住的参考序列进行比对。
| 狗检测 | 猪检测 | 通常暗示 |
|---|---|---|
| 阳性 | 阴性 | 检出狗源DNA |
| 阴性 | 阳性 | 检出猪源DNA |
| 阳性 | 阳性 | 可能含有两种DNA ，也可能存在传染或非特异扩增 |
| 阴性 | 阴性 | 可能是DNA量不及、降解、抑造物残留或靶标不合用 |
必要把稳 ，凝胶上的一条条带自身并不蹬宗“已经确认是狗”或“已经确认是猪”。只有当条带大幼切合经过验证的检测系统 ，并且阳性、阴性对照均正常时 ，条带才拥有诠释价值。若选取测序 ，则应同时关注序列覆盖领域、类似度和是否存在多个混合峰 ，不能只看数据库中一个最高匹配名称。
样本经过加热、腌造、冷冻或持久保留：改用短片段和实时PCR
熟肉、加工食品、皮革、干燥组织和持久保留的毛发 ，时时存在DNA降解、蛋白质残留或化学抑造物。此时直接扩增长片段容易出现“没有条带”的了局 ，但这并不愿定暗示样本中没有狗或猪DNA。
针对这类样本 ，应优先选择扩增片段较短的物种特异性PCR或实时荧光PCR。实时PCR可能同时纪录扩增过程 ，通常比单纯观察终点条带更适合低含量、部门降解的DNA。尝试中可对统一样本进行独立提取或沉复扩增 ，若是只有一次出现幽微信号 ，应结合阴性对照、扩增曲线和沉复了局综合判断。
若是样本量很少 ，取样时不要反复接触统一部位 ，也不要把分歧样本放在统一容器中。若提取液含有脂肪、盐分、血红素或其他抑造物 ，可沉新纯化DNA ，或使用适合复杂样本的提取流程。对于高度降解的资料 ，短片段检测往往比齐全的DNA条形码测序更容易得到有效了局。
样本可能混有狗和猪：别离检测并确认“混合”结论
若是样正本自混合肉、环境拭子、多个组织部位 ，或者正本就疑惑其中含有两种起源 ，不能只做一次通常PCR后直接下结论。更相宜的做法是使用狗、猪两套相互独立且经过特异性验证的检测系统 ，必要时选取双沉实时PCR。
- 狗靶标阳性、猪靶标阴性：支持样本中存在狗DNA。
- 猪靶标阳性、狗靶标阴性：支持样本中存在猪DNA。
- 两种靶标均阳性：可能是真实混合 ，也可能是取样交叉、尝试传染或引物非特异扩增 ，应沉新分装、独立提取并沉复检测。
- 信号很弱或沉复了局不一致：应查抄DNA浓度、抑造物和扩增曲线 ，不能仅凭一次弱阳性判定。
若是除狗和猪表 ，还可能有其他动物成分 ，能够先做广谱动物DNA筛查 ，再使用DNA条形码测序或高通量测序判断组成。若还要求估算狗、猪各自的比例 ，就必要经过尺度曲线、混合样本验证和沉复尝试的定量步骤 ，不能直接凭据两条PCR条带的深浅估算含量。
送检时应怎么注明 ，能力得到可用了局
没有PCR仪、实时荧光仪和测序设备时 ，最现实的做法是将样本交给具备动物物种鉴定能力的尝试室。委托时应明确写出检测指标 ，例如“检测样本中是否含有狗源DNA和猪源DNA” ，而不是只填写抽象的“DNA鉴定”。同时注明样本类型是新鲜组织、毛发、血液、熟肉还是混合物 ，由于分歧资料必要分歧的提取和扩增规划。
若只必要急剧判断起源 ，可优先选择狗、猪特异性PCR或实时PCR；若必要留下可复核的分子证据 ，可要求提供扩增靶标、对照了局、检测限、沉复检测情况 ，以及测序了局和比对注明。这样得到的汇报能力明显分辨“未检出”“的确阴性”“DNA质量不及”和“同时检出两种起源”等分歧结论。
概括来说 ，狗和猪的DNA鉴定流程是正确取样、提取DNA、选择物种特异性靶标、设置对照、扩增或测序 ，再结合样本类型诠释了局。新鲜单一样本适合通例物种PCR；加工、降解或含量较低的样本更适合短片段实时PCR；疑似混合样本则应别离检测并通过沉复尝试或测序确认。
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